傳統(tǒng)保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞都有一定的毒害作用，研究人員發(fā)現(xiàn)了具有抗凍作用的新型保護(hù)劑：抗凍蛋白(AFP)[孔一6]和冰結(jié)合蛋白(IBF)[2卜29]。AFPs具有與冰晶結(jié)構(gòu)相似的性質(zhì)并且可以降低冰晶以針狀沿中心軸生長(zhǎng)的速度，IBF則可以抑制再結(jié)晶，從而保護(hù)細(xì)胞膜[3引。
液氮罐廠家
目前廣泛使用的極地魚抗凍蛋白由于價(jià)格昂貴受到限制，而從微生物中提取抗凍蛋白可大大降低成本，其將成為研究的熱點(diǎn)并取代魚蛋白而占有市場(chǎng)。
雖然液氮超低溫保存體系的研究已經(jīng)較為深入、成熟，并且為自然資源的長(zhǎng)期保存做出了重大的貢獻(xiàn)，但是仍然存在一些問題需要引起人們的關(guān)注。
(1)經(jīng)常使用的液氮是未經(jīng)滅菌的，將裝有材料的冷凍管浸入到液氮中時(shí)，液氮可能滲透到管中引起微生物污染[3嵋;
(2)微生物長(zhǎng)期保存不僅要保證菌株的生理性狀還要保證遺傳信息的完整性，保藏過程中僅以活性指標(biāo)判斷微生物是否保藏完好有些片面。StoychevaE3z]研究發(fā)現(xiàn)，將酵母菌Saccharornycescerevisi投入到液氮中進(jìn)行快速冷凍無突變被誘發(fā)。
然而在4℃下預(yù)凍2 h，然后一10℃下冷凍1 h，再在一20℃下放置16 h的逐級(jí)降溫過程中易誘導(dǎo)線粒體rho一突變體生成。
同時(shí)，StamenovaE33]也發(fā)現(xiàn)慢速冷凍和逐級(jí)冷凍下，線粒體氧化磷酸化、超氧化物陰離子的積累導(dǎo)致基因組Tyl轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)移。然而研究者往往只重視存活率和生理生化性能的穩(wěn)定，卻忽視了對(duì)基因組變化及完整性的檢測(cè)。
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隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，利用PCR、AFLP、RFLP等分子標(biāo)記技術(shù)檢查基因組變化已經(jīng)成為可能。因此使用生理生化穩(wěn)定性和基因組完整性這個(gè)雙重指標(biāo)評(píng)價(jià)一個(gè)保存方案的可行性是必要的。
